Лаборатории клинической микологии теперь готовят меньше тизерных препаратов нитчатых грибов, но все чаще используют различные методы липкой ленты или скотча для микроскопического изучения плесени. Препараты часто готовятся с помощью прозрачной целлофановой ленты по процедуре, аналогичной описанной в третьем издании книги Larone’s Third Edition of Medically Important Fungi: a Guide to Identification (1). Поскольку это не самая распространенная лента общего назначения, прозрачная лента часто доступна только в магазинах товаров для творчества или искусства. Характерно, что прозрачная лента представляет собой относительно толстую и прочную пленку с различными оптическими свойствами. Подготовка липких препаратов с использованием матовой ленты имеет несколько преимуществ. Во-первых, она легко доступна как стандартный предмет на столе почти в каждой лаборатории или офисе, физически это очень плоский, тонкий материал и, наконец, ее можно легко порвать. Работа с любой лентой руками в перчатках может представлять трудности, но подготовка липких препаратов голыми руками также может представлять некоторые риски для безопасности миколога. В настоящем документе описан простой, безопасный и легко выполнимый метод монтажа с использованием матовой ленты. В результате получается высококачественная лента для микроскопического исследования.
Процедура.
Руками без перчаток оторвите от рулона ленты кусок матовой ленты длиной около 2 дюймов. Поместите аппликатор параллельно длине ленты, наложив его с нахлестом примерно на 1/2 дюйма на середину липкой стороны ленты. Оберните ленту вокруг палочки и на себя, клей к клею, закрепив ее на палочке. Используя ножницы, сделайте надрез перпендикулярно длине ленты, на половину или треть по ширине ленты, примерно на 1/2 дюйма от свободного конца. Можно подготовить несколько ленточных «флажков» одновременно, если необходимо сделать несколько ленточных креплений. При необходимости в этот момент можно надеть перчатки. Чтобы подготовить крепление, держите флажок ленты за ручку аппликатора и прикоснитесь лентой к колонии грибков в чашке для культивирования, открытой в боксе биологической безопасности. Чтобы обеспечить контакт между лентой и колонией плесени, используйте вторую палочку-аппликатор, чтобы прижать ленту к поверхности мицелия. Поднимите флажок ленты с прикрепленными грибковыми элементами из колонии и опустите его на каплю монтажной среды, такой как лактофуксин или лактофеноловый анилиновый синий, на покровном стекле. Используя вторую палочку-аппликатор, крепко удерживайте уголок конца ленты на покровном стекле, одновременно осторожно потянув первую палочку. Это движение разорвет разрез ножницами, оставив кусок ленты с грибком в монтажной среде на покровном стекле. Нанесите вторую каплю монтажной среды на открытую поверхность ленты и осторожно опустите на нее предметное стекло микроскопа. Поднимите и переверните препарат так, чтобы покровное стекло оказалось сверху. Готовый препарат, теперь готовый к микроскопическому исследованию, состоит из покровного стекла, грибковых структур в монтажной среде, ленты, второй капли монтажной среды и, наконец, предметного стекла микроскопа.
Безопасный и эффективный метод липкого слоя с использованием матовой ленты. Аппликаторная палочка располагается на липкой стороне матовой ленты. Лента оборачивается вокруг аппликаторной палочки, которая фиксирует ленту на палочке, и делается горизонтальный надрез на расстоянии 0,5 дюйма от свободного конца. (C) Лента прикасается к грибку и помещается грибковой стороной вниз на каплю монтажной среды на покровном стекле, а палочка удаляется. Показано развернутое изображение готового препарата липкого слоя.
Как правило, подготовленные таким образом препараты имеют превосходное оптическое качество, поскольку лента находится позади грибка, а не на оптическом пути, где она может вызвать искажение микроскопического изображения. Поскольку лента тонкая, препарат обычно ложится ровно, без раздражающей ряби, которая может возникнуть при использовании более толстой прозрачной ленты. Если ленту аккуратно обрезать, можно сделать более мелкие флаги для подготовки липких препаратов из пробирочных культур.